原代細(xì)胞分離是指將組織分散制成細(xì)胞懸液后從中獲取目的細(xì)胞的過程，獲得高純度、高活性的原代細(xì)胞則是很多細(xì)胞實驗成功的關(guān)鍵要素之一。

　　原代細(xì)胞分離提取優(yōu)化七步法

　　1、無菌

　　確保使用無菌設(shè)備、試劑和技術(shù)收集和處理組織。使用個人防護設(shè)備以避免污染。使用0.22微米的膜無菌過濾所有酶和試劑。

　　2、切塊

　　用無菌剪刀或手術(shù)刀將組織標(biāo)本切成小塊(通常為2×4mm)，然后將小塊放入選定的緩沖液、培養(yǎng)基或鹽溶液中。

　　3、加酶

　　將組織清洗三次以消除多余的血液蛋白，然后加入您選擇的酶如膠原酶、蛋白酶、木瓜蛋白酶或胰蛋白酶。通常，約0.5mg/ml～1.5mg/ml的酶。

　　4、孵育

　　將組織樣本在其最佳溫度下孵育，通常在37℃下孵育30～90分鐘。定期混合或輕輕搖動標(biāo)本。

　　5、洗滌

　　通過輕輕移液來分散細(xì)胞(也稱為研磨)，然后，使用細(xì)網(wǎng)過濾細(xì)胞懸浮液。讓細(xì)胞沉淀并潷出多余的含液酶;洗兩到三次。含有FBS，BSA或其他抑制劑的洗滌溶液也可用于阻止酶消化。

　　6、分析

　　將細(xì)胞重懸于正確的培養(yǎng)基或緩沖液中，然后定量測定細(xì)胞產(chǎn)量和活力。這是細(xì)胞分離過程中的重要步驟，因此您可以評估解離技術(shù)的結(jié)果。大多數(shù)研究人員使用血細(xì)胞計數(shù)器測定細(xì)胞產(chǎn)量，并使用臺盼藍重氮染料測量細(xì)胞活力。

　　7、培養(yǎng)

　　這個適合，就可以根據(jù)所分離的細(xì)胞來選擇適合研究的方案和處理步驟來培養(yǎng)細(xì)胞了。

　　重點注意事項：

　　1、使用細(xì)胞分離酶時，請注意溫度和濕度條件。如蛋白水解酶可以自動分解，因此建議在使用前立即將其溶解，并在冰上保存2°C～8°C。

　　2、通常用于細(xì)胞分離的大多數(shù)酶可以直接溶解于平衡鹽溶液或所選緩沖液中。對于許多細(xì)胞分離中，確保解離期間的組織存活，需要孵育培養(yǎng)基充分氧化并在生理pH下緩沖。95%O2、5%CO2平衡的介質(zhì)來完成。