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外周血單核細(xì)胞分離 外周血單個(gè)核細(xì)胞包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。單個(gè)核細(xì)胞的體積、形態(tài)和比重與外周血其他細(xì)胞不同，紅細(xì)胞和多核白細(xì)胞的比重在1.092左右，單個(gè)核細(xì)胞的比重為1.075-1.090，血小板為1.030-1.035。因此利用一種介于1.075-1.092之間而近于等滲的溶液作密度梯度離心，使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布，可將各種血細(xì)胞與單個(gè)核細(xì)胞分離

原代細(xì)胞分離：體外將動(dòng)物某組織，經(jīng)酶法或機(jī)械處理法分離成單細(xì)胞，并在合適的培養(yǎng)基中篩選出特定細(xì)胞，使得目的細(xì)胞得以生存、生長(zhǎng)和繁殖，稱(chēng)為原代細(xì)胞分離。

miRNA高通量測(cè)序 microRNA(miRNA)是一種大小約21—23個(gè)堿基的單鏈小分子RNA，是由具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的約70-90個(gè)堿基大小的單鏈RNA前體經(jīng)過(guò)Dicer酶加工后生成，不同于siRNA(雙鏈)但是和siRNA密切相關(guān)。microRNA通過(guò)和靶基因mRNA堿基配對(duì)引導(dǎo)沉默復(fù)合體(RISC)降解mRNA或抑制mRNA的翻譯，從而在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控蛋白表達(dá)(

甲基化檢測(cè) DNA甲基化是最早發(fā)現(xiàn)的基因表觀修飾方式之一，真核生物中的甲基化僅發(fā)生于胞嘧啶，即在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶（DNMTs）的作用下使CpG二核苷酸5’-端的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?’-甲基胞嘧啶。DNA甲基化通常抑制基因表達(dá)，去甲基化則誘導(dǎo)了基因的重新活化和表達(dá)。這種DNA修飾方式在不改變基因序列前提下實(shí)現(xiàn)對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控。

熒光素酶報(bào)告基因是指以熒光素(luciferin)為底物來(lái)檢測(cè)螢火蟲(chóng)熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報(bào)告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過(guò)程中，會(huì)發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。

過(guò)表達(dá)腺病毒包裝 腺病毒是一種線(xiàn)性雙鏈DNA無(wú)包膜病毒，對(duì)分裂期細(xì)胞和非分裂期細(xì)胞均具有感染能力，且具有嗜上皮細(xì)胞性。重組腺病毒載體是以腺病毒為基礎(chǔ)發(fā)展起來(lái)的工具病毒載體，它可通過(guò)受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，但腺病毒基因組不整合進(jìn)入宿主細(xì)胞基因組中。腺病毒作為一種常用的基因操作工具，在心血管、肝臟、肌肉、肺、腫瘤及其他領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。

過(guò)表達(dá)慢病毒構(gòu)建及包裝實(shí)驗(yàn)：慢病毒（Lentivirus）載體是以 HIV-1 （人類(lèi)免疫缺陷1型病毒）為基礎(chǔ)發(fā)展起來(lái)的基因治療載體。具有感染譜廣泛、可以有效感染分裂期和靜止期細(xì)胞、長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)外源基因等優(yōu)點(diǎn)，因此成為導(dǎo)入外源基因的有力工具?，F(xiàn)在慢病毒系統(tǒng)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用到各種細(xì)胞系的基因過(guò)表達(dá)、RNA干擾、microRNA研究以及活體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中。

質(zhì)粒轉(zhuǎn)化 將質(zhì)粒 DNA 導(dǎo)入細(xì)菌的過(guò)程稱(chēng)為轉(zhuǎn)化（ Transformation ）。此感受態(tài)細(xì)菌細(xì)胞在 CaCl 2 低滲溶液中膨脹為球狀（感受態(tài)細(xì)菌的制備，見(jiàn)前）。質(zhì)粒 DNA 與 CaCl 2 形成抗 DNase 羥基 - 磷酸鈣復(fù)合物黏附于細(xì)菌表面，經(jīng) 42℃ 短時(shí)間熱沖擊處理，促進(jìn)細(xì)胞吸收 DNA 復(fù)合物。在豐富培養(yǎng)基上生長(zhǎng)數(shù)小時(shí)后，球狀細(xì)胞復(fù)原并分lie增殖。