簡要描述:茜素紅染色:成骨分化是干細胞的一個重要特性。在特定的誘導培養(yǎng)基作用一段時間后,干細胞可分化為成骨細胞,在細胞表面沉積鈣鹽,形成鈣結節(jié)。應用茜素紅的復合物,可用于鑒定干細胞是否已成功向成骨細胞轉化。
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?樣本固定?
成骨誘導分化結束后,吸去培養(yǎng)基,用1×PBS輕柔洗滌細胞2~3次?23。
加入4%多聚甲醛或10%福爾馬林固定液,室溫固定30分鐘?12。
?洗滌與風干?
去除固定液后,用蒸餾水或1×PBS沖洗3次以去除殘留固定劑?12。
風干載玻片或培養(yǎng)板,確保樣本干燥?34。
?染色處理?
加入0.1%茜素紅染色液(溶于0.05M Tris-HCL緩沖液,pH8.3),37℃孵育5-30分鐘(時間依鈣鹽含量調整)?12。
染色后迅速用蒸餾水沖洗,避免染料殘留導致背景過深?23。
?復染與觀察?
可選固綠染色液復染1分鐘以增強背景對比度?34。
顯微鏡下觀察:鈣結節(jié)呈橙紅色,背景為綠色或粉紅色?23。
?保存?
染色后樣本用封口膜密封,4℃保存可維持染色效果2周?23。
?操作輕柔?
避免劇烈震蕩或長時間暴露于液體中,防止鈣結節(jié)脫落?12。
?染色條件優(yōu)化?
染色液使用前需恢復至室溫,染色時間根據(jù)鏡下鈣鹽沉積量動態(tài)調整(通常5-10分鐘)?23。
染色過深時可用1%鹽酸酒精分色?4。
?試劑選擇?
推薦使用商品化茜素紅S試劑(如Beyotime ST1078-5g),純度穩(wěn)定?5。
固定劑優(yōu)先選擇中性福爾馬林,避免酸性條件干擾鈣鹽結構?24。
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